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DNA RNA 在细胞中的分布实验
2008-5-30

  DNA主要分布在细胞核内,RNA大部分存在于细胞质中。甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNARNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示 DNARNA在细胞中的分布。

  以下是我们公司进行该实验的流程:

1.       溶液的配置

(1)    1% 甲基绿溶液的配置:称取0.1g 甲基绿粉末溶于10mL水,过滤分装,避光保存。

(2)    1% 吡罗红溶液的配置:称取0.1g 吡罗红粉末溶于10mL水,过滤分装,避光保存。

(3)    0.2mol/L 醋酸钠:0.164g醋酸钠溶于10mL水。

(4)    0.2mol/L 醋酸:0.12ml 醋酸溶于10mL水。

(5)    A液配制:1.2mL1%甲基绿+1mL1%吡罗红+0.2 mL蒸馏水,避光保存。

(6)    B液配制:3mL 0.2mol/L醋酸钠+2 ml 0.2mol/L醋酸+5 mL蒸馏水。

(7)    罗红甲基绿染色液:2.4mL A+9.6 mL B液,分装后避光保存。

2.       实验步骤

(1)    在载玻片上滴50μL生理盐水

(2)    取洋葱内表皮细胞

(3)    烘干

(4)    载玻片+8%HCl 30 mL, 30保温5 min

(5)    蒸馏水冲洗载玻片10s

(6)    吸去载玻片上多余的水分

(7)    吡罗红甲基绿染色液染色5 min

(8)    吸去多余染色液,盖上盖玻片

  在实验中要注意以下几个方面:

(1)      在选择实验用细胞时最好选择洋葱内表皮细胞,其细胞较大且无色,便于染色与观察

(2)      本实验使用的是吡罗红G, 呈绿色,水溶液呈红色

(3)      经过反复实验证明染色液中甲基绿:吡罗红=1.21时,染色效果最好

(4)      商品甲基绿常混有甲基紫,会影响甲基绿染色效果,用氯仿抽提1% 甲基绿溶液可除去甲基紫,但在抽提过程中甲基绿会损失很多,造成1% 甲基绿溶液浓度变低,所以应增加染色液中1% 甲基绿溶液的含量。

 

 

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