DNA主要分布在细胞核内,RNA大部分存在于细胞质中。甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同,甲基绿使DNA呈现绿色,吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色,可以显示 DNA和RNA在细胞中的分布。
以下是我们公司进行该实验的流程:
1.
溶液的配置
(1)
1% 甲基绿溶液的配置:称取0.1g 甲基绿粉末溶于10mL水,过滤分装,避光保存。
(2)
1% 吡罗红溶液的配置:称取0.1g 吡罗红粉末溶于10mL水,过滤分装,避光保存。
(3)
0.2mol/L 醋酸钠:0.164g醋酸钠溶于10mL水。
(4)
0.2mol/L 醋酸:0.12ml 醋酸溶于10mL水。
(5)
A液配制:1.2mL1%甲基绿+1mL1%吡罗红+0.2 mL蒸馏水,避光保存。
(6)
B液配制:3mL 0.2mol/L醋酸钠+2 ml 0.2mol/L醋酸+5 mL蒸馏水。
(7)
吡罗红甲基绿染色液:2.4mL A液+9.6 mL B液,分装后避光保存。
2.
实验步骤
(1)
在载玻片上滴50μL生理盐水
(2)
取洋葱内表皮细胞
(3)
烘干
(4)
载玻片+8%HCl 30 mL, 30℃保温5 min
(5)
蒸馏水冲洗载玻片10s
(6)
吸去载玻片上多余的水分
(7)
吡罗红甲基绿染色液染色5 min
(8)
吸去多余染色液,盖上盖玻片
在实验中要注意以下几个方面:
(1)
在选择实验用细胞时最好选择洋葱内表皮细胞,其细胞较大且无色,便于染色与观察
(2)
本实验使用的是吡罗红G, 呈绿色,水溶液呈红色
(3)
经过反复实验证明染色液中甲基绿:吡罗红=1.2:1时,染色效果最好
(4)
商品甲基绿常混有甲基紫,会影响甲基绿染色效果,用氯仿抽提1% 甲基绿溶液可除去甲基紫,但在抽提过程中甲基绿会损失很多,造成1% 甲基绿溶液浓度变低,所以应增加染色液中1% 甲基绿溶液的含量。